Single Read Sequencing - Sample Requirements
Concentration:
Plasmides: 30-100ng/µl
Fragments de PCR: 10-50ng/µl
Amorces individuelles: 10pmol/µl
Volumes:
ADN & amorces: 20µl de chaque (suffisant pour 8 réactions), pour les plaques de 96 puits envoyez s'il vous plaît le séquençage de 50µl dans un seul tube. Veuillez envoyer l’ADN dissous dans l’eau. La solution ne doit pas contenir d’EDTA. Echantillons ADN et amorces en tubes de 1,5ml ou en plaques microtitres de 96 puits.
Conditions d' amorces:
La température de fusion (TM) de l'amorce doit être comprise entre 52 ° et 58 ° C et la longueur doit être comprise entre 17-19bp. Idéalement, la teneur en GC d'un oligo de 17mer devrait être de 7-9 (G + C) ; pour un 18mer, de 8-9 (G + C) et pour un 19mer, de 10 (G + C).
Un G ou C doit être à l'extrémité 3 ', mais pas plus de 3 G ou C. La séquence de l'amorce doit être un bon mélange de tous les 4 nucléotides sans repetition de plus de 4 bases identiques à la suite (AAAA ou GGGG).
Stockage d'ADN et amorces:
Stockage de votre ADN et amorces: pendant 10 jours
Stockage de votre amorces synthétisés de GATC Biotech: pendant un an
