Single Read Sequencing - Sample Requirements
Konzentration:
Plasmide: 30-100ng/µl
Cosmide/BAC/PAC: >100ng/µl
PCR-Produkte: 10-50ng/µl
Kundenprimer: 10pmol/µl
Volumen:
DNA & Primer: je 20µl (ausreichend für 8 Reaktionen), bei 96 Well-Sequenzierung senden sie bitte 50µl in einzelnen Tubes. Bitte senden Sie die DNA in Wasser gelöst. Die Lösung darf kein EDTA enthalten. Bitte liefern Sie DNA und Primer in 1,5ml Reaktionsgefäßen bzw. 96-Well Mikrotiterplatten.
Primerbedingungen:
Die Schmelztemperatur (TM) des Primers sollte zwischen 52 bis 58°C liegen und der Primer eine Länge von 17-19 bp haben. Optimalerweise liegt der GC-Gehalt bei 17bp Länge bei 7-9 G+C; bei 18bp Länge bei 8-9 G+C und bei 19bp Länge bei 10 G+C.
Am 3' -Ende sollte ein G oder C sein und nicht mehr als 3 G oder C. Alle 4 Basen sollten vertreten sein und nicht mehr als 4 gleiche Basen hintereinander auftreten.
Lagerung DNA und Primer:
Lagerung der von Kunden gelieferten DNA und Primer: 10 Tage
Lagerung der von GATC Biotech synthetisierten Kundenprimer: 1 Jahr
